核染色で使うDAPIとヘキスト（Hoechst）の違いを説明できますか？
核染色で使うDAPIとヘキスト（Hoechst）の違いを説明できますか？

核染色で使うDAPIとヘキスト（Hoechst）の違いを説明できますか？

生命科学系の実験で必ずと言って良いほどやるのが、細胞の染色です。細胞を染色するときに必ず行う核の染色。 核の染色でよく使われるのはDAPIやHoechstですが、その違いをあなたは説明できますか？ 核

生命科学系の実験で、細胞の中の細かい構造体を見たいときには蛍光プローブを使って観察することが一般的になっています。 蛍光プローブが発する蛍光を観察する方法として、「蛍光顕微鏡」を使う場合と「共焦点レーザー顕微鏡」を使う場合があります。 「蛍光顕微鏡」は細胞を観察するような倒立型位相差顕微鏡に付属して.

DAPIを使った固定細胞の核染色

これはAlexa試薬などと蛍光波長が離れているため、免疫染色などの共染色にもよく用いられます。

DAPIストックの作製（1 mg/mL） （水に溶解する） ↓ 0.1 μg/mLになるようにPBS(-)で希釈（1/10000倍希釈） ↓ 二次抗体染色後・ブロッキング後の固定細胞に加える ↓ 室温で5分程度incubate ↓ DAPI染色液を除去 ↓ 蛍光観察

ヘキスト（Hoechst）染色

Hoechst33342、Hoechst34580は類似した励起ー蛍光スペクトルを持っている。（励起波長：350 nm程度、蛍光波長：461 nm）

細胞透過性が強いので生細胞の核を染色によく用いられる。

Hoechstを使った生細胞の核染色 Hoechstストックの作製（10 mg/mL） （水への溶解度が低いので超音波処理をして溶解） ↓ 5 μg/mL（0.1-12 μg/mLの濃度幅で使われる）になるようにPBS(-)で希釈（1/2000倍希釈）

（培養液で希釈すると蛍光が弱くなるので注意が必要） ↓ 培養皿の培養液を除去する ↓ Hoechst染色液をdishに加える ↓ 37℃で10分程度incubate ↓ ヘキスト染色液を除去し、PBS(-)で3回wash ↓ 蛍光観察

HoechstとBrdUを使った細胞周期の観察 BrdUとは？

DAPIとHoechstの違い まとめ

  • （類似点1） DNAの副溝のATリッチな部分に結合して蛍光を発する
  • （類似点2） 励起波長が350 nm程度、蛍光波長が460 nm程度の青い蛍光を発する
  • （相違点1） 細胞膜の透過度がHoechstの方が高い。 DAPIは固定細胞染色、Hoechstは生細胞染色に用いられることが多い
  • （相違点2） 毒性はHoechstの方が低いとされている。
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